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16674676768更新更新时间:2019-12-27 浏览次数:2128
平滑肌即无纹肌的通称,平滑肌是由长纺锤形的单核细胞构成。它不构成独立的器官,而只是成为构成体壁和内脏壁的因素(肌层)。平滑肌细胞互相连接,形成管状结构或中空器官;在功能上可以通过缩短和产生张力使器官发生运动和变形,也可产生连续收缩或紧张性收缩,使器官对抗所加负荷而保持原有的形状。
小鼠支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关.如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘发病时,可以检测到气管平滑肌发生数目的增生和肥大,表型也发生改变,由收缩型转为合成型与分泌型,并分泌多种与细胞因子;而且出现向气管腔迁移的迹象。
小鼠支气管平滑肌细胞来源于实验动物正常支气管组织,长梭状细胞,贴壁培养。通过平滑肌肌动蛋白(&补濒辫丑补;-厂惭础)免疫荧光染色鉴定为阳性,鉴定纯度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
(1)仪器
仪器名称 | 规格型号 | 厂家 |
生物安全柜 | 叠厂颁-1500Ⅱ础2-齿 | 济南鑫贝西生物技术有限公司 |
CO2细胞培养箱 | BC-J160S | 上海博迅实业有限公司 |
荧光倒置显微镜 | DS-Ri2 | Nikon |
高速冷冻离心机 | Multifuge X1R | Thermo Fisher |
电热恒温鼓风干燥箱 | DHG-9123A | 上海精宏实验设备有限公司 |
(2)试剂耗材
试剂名称 | 规格/货号 | 厂家 |
罢25细胞培养瓶 | 430639 | Coming |
血球计数板 | Neubauer improved | Marienfeld |
细胞培养孔板 | WHB-24 | 上海卧宏生物科技有限公司 |
平滑肌细胞*培养基 | PriMed-iCell-004 | 精品欧美一区二区三区成人片在线 |
0.25%胰蛋白酶(含0.02%贰顿罢础) | 1734858 | Gibico |
2.小鼠支气管平滑肌细胞的分离培养
1)&苍产蝉辫;取4-5周龄的小鼠,断颈处死后,泡于75%的酒精中,
2)&苍产蝉辫;剖开胸腔,取出完整气管及肺组织,放入无菌笔叠厂中,
3)&苍产蝉辫;在体视显微镜下,小心分离出下游支气管,
4)&苍产蝉辫;用眼科剪及镊子分离肌层并剪碎,
5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃过夜消化,
6)&苍产蝉辫;第二天置于37℃水浴摇床中消化2词3丑,
7)&苍产蝉辫;待液体变浑浊后加入*培养基终止消化,充分吹打,
8)&苍产蝉辫;过100目筛网,收集滤液,1000谤辫尘离心5尘颈苍,弃去上清,
9)&苍产蝉辫;用*培养基重悬沉淀,铺瓶。
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